Tεχνολογία του Ανασυνδυασμένου DNA (Recombinant DNA)

(1/1)

Giorgio T:
Πρόλογος: Πρίν από αρκετές μέρες μας έιχε ζητήσει ο κ.Μπουράνης να αρχίσουμε να "χαρτογραφούμε" τα βιβλία του τμήματός μας ανά έτος ώστε κάποια στιγμή να έχουμε κάτι σαν οδηγό με το περιεχόμενο του κάθε μαθήματος. Εαν πάρει κάποιος από ένα βιβλίο και κάνει κάτι ανάλογο θα βγει κάτι πολύ χρήσιμο και ουσιαστικό. Δεν θα χρειάζεται να ρωτάμε παλιότερους ποια μαθήματα να διαλέξουμε ανα εξάμηνο και δεν θα βρισκόμαστε προ εκπλήξεως με κάποια λάθος επιλογή. Αυτά προς το παρόν, μπαίνω στο κύριο μέρος...


Καταρχήν το μάθημα το κάνουν 3 καθηγητές: Κούρτη, Μηλιώνη, Φλεμμετάκης
Οι σημειώσεις χωρίζονται σε 3 μέρη (όσοι και οι καθηγητές).  Το αρνητικό: Ένα μέρος αυτών δίνεται απο CD ενώ υπάρχει και ένα μεγάλο κομμάτι στα αγγλικά. Επειδή το μάθημα έιναι σχετικά καινούριο, θα έλεγα πως είναι κάτι ενδιάμεσο μεταξύ θεωρίας και εγχειριδίου (και εδώ έγκειται η "δυσκολία" του σαν μάθημα)

Τι διαπραγματεύεται;

Σημειώσεις Φλεμμετάκη.
Γίνεται εκενής αναφορά στην PCR, δηλαδή το πως λειτουργεί, τα ένζυμα που χρησιμοποιεί, τα στάδιά της κ.α. Εργαστηριακές εφαρμογές της PCR: Κλωνοποίηση τμημάτων DNA, Ανάστροφη PCR, In vitro μεταλλαξιγέννεση (κατευθυνόμενες ελλείψεις-σημειακές μεταλλάξεις-κατευθυνόμενες ενθέσεις), Real Time PCR.
Διαγνωστικές εφαρμογές: Πολλαπλό PCR (Multiplex), Ταυτοποίηση γενετικών μεταλλάξεων, Ταυτοποίηση γονοτύπων
Ενίσχυση ακολουθιών RNA: Ενίσχυση άκρων των cDNA (RACE PCR), προσδιορισμός επιπέδων mRNA, RT PCR διαφορικής έκεσης
Άλλο κεφάλαιο είναι οι cDNA βιβλιοθήκες που μιλά για τη σύνθεση cDNA, για PCR και cDNA, για δημιουργία βιβλιοθηκών cDNA καθώς επίσης και για φορείς που χρησιμοποιούνται για κλωνοποίηση των cDNA (φορείς πλασμιδιακοί-φαγικοί-έκφρασης)

Σημειώσεις Κούρτη.
Εδώ συναντά κανείς μερικά από τα "θαύματα" της βιοτεχνολογίας και της εφαρμογές της αλλά είναι πολύ δύσκολο να τα θυμάται απ' έξω! Χωρίζεται σε 3 μεγάλα μέρη.
Το 1ο αναφέρεται  στην έκφραση ετερόλογων πρωτεϊνών σε προ- και ευκαρυωτικούς οργανισμούς (τρόπους και συστήματα που κάνουν αυτή τη δουλειά) καθώς και συστήματα έκφρασης σε ζωικά κύτταρα (αδενοϊός-βακουλοϊός-ρετροϊός ως φορέας έκφρασης).
Το 2ο μας παρουσιάζει τις τεχνικές εκείνες (χημικές-τεχνικές-βιολογικές) που επιτυγχάνουν τη μεταφορά του DNA σε ζωικά κύτταρα. (Ξέρατε ότι ένας τρόπος είναι και ο σωματιδιακός βομβαρδιμός??!! Ειδικό όπλο "πυροβολεί" κύτταρα με σφαιρίδια που έχουν απορροφήσει επιχρίσματα DNA, "τρυπάει" την κυτταρική τους μεμβράνη και τα νουκλεϊκά όξέα εισέρχονται στο εσωτερικό του κυττάρου..!!!!!)
Το 3ο μέρος κάνει λόγο για τη γενετική τροποποίηση ζώων. Όσο ωραίο κι αν ακούγεται, δυστυχώς περιλαμβάνει αρκετές μεθόδους και διαδικασίες για παραγωγή διαγονιδιακών ποντικών, χοίρων και άλλων ζώων  και πτηνών που δεν είναι ότι πιο εύκολο να το ξέρεις, μεταφορά DNA σε σπονδυλωτά και ασπόνδυλα.

Σημειώσεις Μηλιώνη.
Εδώ ο τίτλος είναι Βασικές μεθοδολογικές προσεγγίσεις.
Μιλά για ηλεκτροφόρηση, για κλωνοποίηση και τους φορείς κλωνοποίησης (πλασμίδια E.coli-ιικοί φορείς-κοσμιδιακοί-BACs-YACs), μας δίνει λεπτομερέστατα τα σημαντικότερα ένζυμα (νουκλεάσες-λιγάσες-πολυμεράσες-τροποποιητικά ένζυμα). Επίσης περιέχει τον υβριδισμό νουκλεϊνικών οξέων και τη μεταφορά τους (Southern-Northen blot), in situ υβριδισμό και DNA sequensing. Τέλος αναφέρεται και σε πιο πρόσφατες εφαρμογές όπως οι "παγίδες ενεργοποίησης".

Το εργαστήριο:
Χωρίζεται σε 6 επιμέρους εργαστηριακές ασκήσεις υπο μορφή μιας ενιαίας. Τα εργαστήρια γίνονται σε 6-7 συνεχόμενες μέρες και περιλαμβάνουν:
ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ λ-ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΥ ΜΕ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΕΣ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΥ
ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΚΑΙ ΤΙΤΛΟΔΟΤΗΣΗ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΩΝ λ-ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΩΝ
In vivo ΕΚΚΟΠΗ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΟΥ    ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ pBluescript SK- ΑΠΟ ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟ λZAP
AΠΟΜΟΝΩΣΗ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ pBluescript SK- ΚΑΙ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΕΝΘΕΤΟΥ cDNA
ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΓΕΝΩΜΑΤΙΚΟΥ DNA ΑΠΟ ΦΥΤΑ ARABIDOPSIS
ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟΣ ΔΕΚΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ E.COLI ΠΛΑΣΜΙΔΙΑΚΟ DNA
                                         
                                                        :up:

                              Το μόνο που έχω να πω: αξίζει τον κόπο!!!

ΥΓ.  Σχόλια και υποδείξεις ΔΕΚΤΑ!

fotonio:
Το εχουμε εμπεδώσει πλεον ότι γούσταρες πολυ τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA.

Συμφωνώ και επαυξάνω πάντως.!!  :up: :up:

skoupidei:
 :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub: :wub:

Έχω πορωθεί εντελώς. Περιμένω πως και πως, μόνο αυτό.

Ria:
Se ti examino einai?

stam:
Εμείς το διδαχτήκαμε στο 7ο εξάμηνο...

Πλοήγηση

[0] Λίστα μηνυμάτων